Spektrofotometri UV-Vis

SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

A. Pendahuluan
Spektrofotometri UV-Vis adalah anggota teknik analisis spektroskopik yang memakai sumber radiasi elektromagnetik ultra violet dekat (190-380nm) dan sinar tampak (380-780nm) dengan memakai instrumen spektrofotometer.
Spektrofotometri UV Vis melibatkan energi elektronik yang cukup besar pada molekul yang dianalisis, sehingga spektrofotometri UV_Vis lebih banyak dipakai untuk analisis kuantitatif dibandingkan kualitatif.

B. Pemilihan Pelarut
Spektrofotometri UV-Vis dapat melakukan penentuan terhadap sampel yang berupa larutan,gas,atau uap. Untuk sample yang berupa larutan perlu diperhatikan beberapa persyaratan pelarut yang dipakai antara lain :

• Pelarut yang dipakai tidak mengandung ikatan rangkap terkonjugasi pada struktur molekulnya.
• Pelarut yang digunakan tidak   berwarna .
• Tidak terjadi interaksi dengan molekul senyawa yang dianalisis. 
• Kemurniannya harus tinggi atau derajat untuk dianalisis.

Pada umumnya pelarut yang sering dipakai dalam analisis Spektrofotometri UV Vis adalah air ,etanol,sikloheksan dan isopropano.



C. Rentang pembacaan Absorban dan transmitan

     Analisis dengan spektrofotometri UV-Vis selalu melibatkan pembacaan absorban radiasi elektromagnetik oleh molekul atau radiasi elektromagnetik yang diteruskan. Keduanya dikenal sebagai absorban (A) tanpa satuan dan transmitan dengan satuan persen (% T)

Apabila suatu radiasi elektromagnetik dikenakan pada suatu larutan dengan intensitas radiasi semula (Io), maka sebagian radiasi tersebut akan diteruskan (It),dipantulkan (Ir) dan diabsorpsi (Ia), sehingga :

Io = Ir + Ia +It


Harga I_r (⁺/- 40 %)  dengan demikian dapat diabaikan Karena pengerjaan dengan metode spektrofotometri UV-Vis dipakai larutan pembanding sehingga :

Io = Ia +It

Bouguer,Lambert danReer membuat formula secara matematik hubungan antara transmitan atau absorban terhadpa intensitas radiasi atau konsentrasi zat yang dianalisis dan tebal larutan yang mengabsorpsi sebagai :


     Dimana T = persen transmitan
                 Io = intensitas radiasi yang datang
                 It = intensitas radiasi yang diteruskan
                 ε = absorbansi molar (Lt.mol-1 cm-1)
                 c = konsentrasi (mol.Lt-1)
                 b = tebal larutan (cm)
                A = absorban


Persoalannya adalah bagaimana membaca rentang A dan T yang memenuhi syarat sehingga akan meminimumkan galat sistematik (galat individual).
Untuk pembacaan absorban (A) atau transmitan (T) pada daerah yang terbatas, kesalahan penentuan kadar hasil analisis dinyatakan sebagai :



∆T adalah harga renntang skala transmitan terkecil dari alat yang masih dapat terbaca pada analisis dengan metode spektrofotometri UV-Vis. harga ∆T untuk setiap spektrofotometer UV-Vis biasanya bervariasi 0,2 – 1 % dan selalu dicantumkan sebagai spesifikasi instrumen. Dari rumus tersebut diatas dapat diperhitungkan kesalahan pembacaan A atau T pada analisis dengan metode spektrofotometri UV-Vis pembacaan A atau (0,2 – 0,8) atau % T (15% - 65%) akan memberikan persentase kesalahan analisis yang dapat diterima (0,5 – 1%) untuk ∆T= 1%.

Cara lain yang dipakai sebagai teori perhitungan A terhadap persen galat sebagai akibat radiasi sesatan dan galat yang rawu dari derau instrument yang dinyatakan pada gambar











Gambar 2 : Rentang dinamika pembacaan A pada sebuah spektrofotometer UV-Vis dengan kualitatif radiasi sesatan 0,01% dan derau 0,0005 AU
Dari gambar tersebut diatas dapat dinyatakan bahwa pembacaan absorban 0,3-1 AU akan memberikan kecermatan dan ketelitian yang terbaik. Untuk spektrofotometer UV-Vis yang modern dapat dilakukan pembacaan 0,222 – 2,5 AU dengan kesalahan relatif tidak lebih dari 1%